微生物相襯顯微鏡增加對(duì)比度是相差技術(shù)
對(duì)比度
如果不能將微生物從懸浮的基質(zhì)中分離出來(lái)，會(huì)降低顯微鏡的
放大率和分辨率。利用染料或調(diào)節(jié)光學(xué)系統(tǒng)，可增強(qiáng)對(duì)比度，便于
顯微觀察。
微生物被染料染色后，光線經(jīng)過(guò)時(shí)被吸收的程度高于背景，從
而產(chǎn)生色差，加深了對(duì)比度。觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)或者細(xì)胞壁時(shí)，染
色是一個(gè)非常有用的手段，如革蘭染色。然而，染色經(jīng)常使細(xì)胞結(jié)
構(gòu)發(fā)生變化，這個(gè)問(wèn)題值得注意。雖然亞甲基藍(lán)類染色劑不改變細(xì)
胞形態(tài)，但化學(xué)藥品對(duì)微生物終究是有毒性的。還有一個(gè)選擇就是
負(fù)染色法，利用苯胺黑使背景顏色加深，突出微生物的淺色而增加
對(duì)比度，而且不影響細(xì)胞活性。通過(guò)染色法，能夠得到微生物的相
關(guān)信息，如細(xì)胞的形狀和莢膜的位置等。相差顯微鏡不能觀察顏色
，所以可以用明視野顯微鏡來(lái)觀察染色后的樣品。
另一個(gè)增加對(duì)比度的方法是利用相差技術(shù)，它把透過(guò)標(biāo)本的可
見(jiàn)光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對(duì)比度，使各
種結(jié)構(gòu)變得清晰可見(jiàn)。光線衍射的程度是由介質(zhì)的折射率決定的。
相差顯微鏡就是來(lái)增強(qiáng)微生物和周?chē)h(huán)境之間的折射率而提高它們
的對(duì)比度，使微生物形態(tài)更易于觀察。與明視野顯微鏡相比，相差
顯微鏡的優(yōu)勢(shì)在于可不用染色而清楚地觀察活細(xì)胞。因?yàn)橄嗖铒@微
鏡觀察的樣品不用染色，所以不適用于染色的樣品。
