顯微分光光度計(jì)在顯微鏡上附加光度測(cè)量系統(tǒng)
顯微分光光度計(jì)則采用了雙波長(zhǎng)細(xì)胞光度測(cè)量法,可在顯微鏡
下對(duì)單個(gè)細(xì)胞微細(xì)結(jié)構(gòu)中的核酸、蛋白質(zhì)、酶、糖原等化學(xué)物質(zhì)進(jìn)
行形態(tài)學(xué)定性定位觀察,又可進(jìn)行定量測(cè)定。該儀器具有作透射光
照明的吸收光測(cè)量、落射光照明的熒光和反射光測(cè)量及熒光光譜分
析等多種定性定量測(cè)定功能。一般采用二波長(zhǎng)一測(cè)量場(chǎng)法,也可采
用一波長(zhǎng)二測(cè)量場(chǎng)法或單束光掃描測(cè)量法測(cè)定細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)后被測(cè)
物質(zhì)的相對(duì)含量,由計(jì)算機(jī)程控,對(duì)各測(cè)量點(diǎn)的透光強(qiáng)度值進(jìn)行處
理,并進(jìn)行消光值計(jì)算和分析,打印出細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)物的光密度
值(O.D)、光密度分布直方圖、樣品的數(shù)字圖形及各種信息的分析
結(jié)果。但顯微分光光度計(jì)價(jià)格昂貴,功能較少,目前應(yīng)用不多。
用于吸收細(xì)胞光度測(cè)量的商品儀器,用于掃描和集成顯微密度
測(cè)量。有的通常在顯微鏡上附加一個(gè)光度測(cè)量系統(tǒng)作為測(cè)量?jī)x器。
有一種顯微測(cè)密度計(jì)(microdensitometer)也可測(cè)量細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)(
如DNA的Feulgen反應(yīng))的密度,以確定DNA等物質(zhì)的含量。
又如掃描顯微鏡光度計(jì)系統(tǒng)是由一架標(biāo)準(zhǔn)顯微鏡和兩臺(tái)光度計(jì)
組成。這些儀器由于價(jià)格及用于細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)的定量測(cè)定有一定的
局限性,尚未得到廣泛的推廣應(yīng)用。
微熒光測(cè)量(microfluorimetry)
熒光測(cè)量法,只能用于細(xì)胞化學(xué)中的熒光反應(yīng)較終產(chǎn)物。該法
靈敏度較高,特異性可通過(guò)選擇適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射測(cè)定波長(zhǎng)而
獲得。
顯微鏡不可分辨的小顆粒,用熒光可以測(cè)定,且無(wú)分布性誤差
,因此可以用單個(gè)測(cè)量點(diǎn)代替大面積測(cè)量,從而節(jié)省許多時(shí)間。用
落射光可測(cè)量不透明的或厚的標(biāo)本。但熒光測(cè)量的實(shí)際應(yīng)用還是有
限,能進(jìn)行熒光反應(yīng)的物質(zhì)及建立恰當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)物尚