一般動(dòng)物血管等超微結(jié)構(gòu)常用灌注固定-生物顯微鏡
要想獲得良好的精確的酶活性定位，理論上必須充分考慮每一種影
響因素，但實(shí)際上很難做到，一般盡可能地選擇較佳反應(yīng)條件和較佳操
作步驟。
取材和固定
固定能明顯影響酶活性，但固定使細(xì)胞膜的通透性發(fā)生改變，有利
于底物和捕捉劑的滲透，也有利于形態(tài)結(jié)構(gòu)的保存。固定方法按樣品來
源確定。酶對任何一種固定液都是敏感的，如果因固定而很快喪失活性
(如琥珀酸脫氫酶)，那么只能用不固定的標(biāo)本。但不固定標(biāo)本酶活性過
高時(shí)，會(huì)出現(xiàn)反應(yīng)產(chǎn)物過剩，或者由于酶往往是水溶性的，容易產(chǎn)生酶
本身的擴(kuò)散移位，使酶活性不正確地分布。所以一般均用固定標(biāo)本進(jìn)行
酶細(xì)胞化學(xué)研究。固定的程度按酶的耐受性確定，對于那些耐受固定的
酶也不能過度固定，一般固定程序是，在切片的孵育時(shí)間為15—30min
左右時(shí)，尚能檢出酶的活性為宜。
一般實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用灌注固定，手術(shù)標(biāo)本等用浸泡固定，其中血管或
心臟灌注固定的效果要比浸泡固定好。浸泡固定的主要缺點(diǎn)是固定劑穿
透慢，會(huì)導(dǎo)致組織深部固定不好，而且固定時(shí)間較長會(huì)使酶活性喪失。
血管或心臟灌注固定速度快，固定均勻，固定時(shí)間易控制，因此在保存
酶活性和保存超微結(jié)構(gòu)兩方面部比浸泡固定優(yōu)越。但對于無法用灌注固
定的標(biāo)本(如手術(shù)標(biāo)本)則用浸泡固定。在進(jìn)行大批功能性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，
幾組動(dòng)物需控制相同的酶反應(yīng)條件，灌注固定操作時(shí)間較長，無法做到
使幾組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物同時(shí)取材、同時(shí)固定，并保證固定條件基本一致，這時(shí)
一般只能用浸泡固定。
