恒冷箱切片是光學(xué)顯微鏡酶組織化學(xué)常用較佳切片
切片
根據(jù)實驗需要,切片可用恒冷箱切片、組織切片機(jī)切片、振動切片
機(jī)切片和刀片手切等。
恒冷箱切片
恒冷箱切片是光鏡酶組織化學(xué)中常用的較佳切片。新鮮組織或固定
材料在恒定的冷室、恒定的溫度下能制成厚薄均勻的、無人工假象的切
片。這種切片可作為電鏡酶細(xì)胞化學(xué)實驗的預(yù)試驗和并行觀察。尤其是
定量酶細(xì)胞化學(xué),一般用光鏡組織化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行定量測定,用電鏡酶細(xì)
胞化學(xué)反應(yīng)確定酶的定位差異,兩者結(jié)果互為補(bǔ)充。
冰凍組織時,細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞間質(zhì)的溫度從冰點(diǎn)(約-2℃)到再結(jié)晶(
-130℃)之間會產(chǎn)生冰晶,冰晶的形成是由于大結(jié)晶的水分而產(chǎn)生的。
冰凍時為防止產(chǎn)生冰晶,漂洗后的固定組織可置30%蔗糖液中處理
12—24h,開始時組織塊是浮的,較后沉入瓶底即可置恒冷箱切片機(jī)冷
凍臺上。也可用進(jìn)口的專用冷凍包埋劑(OCTcompound)處理,效果更好
。在冷凍臺的組織置液氮中速凍10min,待組織塊溫度與冷室溫度達(dá)到
平衡時切片。
冷凍時常用液氮或其它冷凍劑。固定組織塊冷凍后,由于組織塊過
度變硬,溫度低于一20℃時傷刀,要升高箱內(nèi)溫度至合適溫度(表5—6
,5—7)。