用于顯微熒光測量的儀器為顯微熒光分光光度計的應(yīng)用
用于顯微熒光測量的儀器為顯微熒光分光光度計(microspectrofluorimeters)
該儀器主要
為用于熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的定量而設(shè)計的?也可測量透射和反射
光譜。利用落射系統(tǒng)還可同時記錄熒光發(fā)射和在激發(fā)波長的透射。
顯微熒光測量時，未知物熒光與標準物熒光相比較才能精確定
量。
熒光標準物的必要條件是：①與被測量的熒光體相同，或至少
是具有相等或相似熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的熒光體；②具有好的重復(fù)
性；③足夠的穩(wěn)定性。一個與蛋白結(jié)合的熒光色素的熒光特性與未
結(jié)合的熒光色素并不相同。
所以，一個熒光色素的溶液可能不適合作為已結(jié)合熒光色素的
標準物。若無標準物，只能對不同實驗組進行相對定量比較。
顯微熒光測量在熒光標記和免疫熒光標記中應(yīng)用較多。神經(jīng)組
織中的兒茶酚胺、神經(jīng)通路的熒光標記、酶、肽、蛋白質(zhì)的免疫細
胞化學(xué)等研究中均可采用顯微熒光測量方法進行定量測定。近年來
應(yīng)用較多的流式細胞光度計也常采用熒光標記測定方法。
