測量總蛋白質(zhì)檢測和分析-分光光度法測量
蛋白質(zhì)的檢測和分析
在蛋白質(zhì)純化過程中，需要進(jìn)行兩種測量，較好對每個組分都
進(jìn)行測量。必須測量總蛋白質(zhì)和目的蛋白的量(通常是測量生物學(xué)
活性)。大多數(shù)常用分析方法的。沒有一種確定蛋
白質(zhì)是否存在的方法，就不可能分離蛋白質(zhì)，因此，必須要有一種
分析方法(定量的或至少半定量的)來確定哪種組分中含有大多數(shù)的
目的蛋白。
有的分析方法方便、快捷(如酶活性的即時分光光度法測量)，
有的則是既耗時又繁瑣的生物學(xué)分析。后者可能需要幾天才能出結(jié)
果，而且這種情況很棘手，因?yàn)楫?dāng)知道了蛋白質(zhì)在哪個組分時，蛋
白質(zhì)可能由于降解或失活已經(jīng)丟失，而且，這種丟失直到下一步完
成并對其產(chǎn)物進(jìn)行分析后才能清楚。因此，任何快速的分析方法都
具有優(yōu)勢，盡管往往會由于加快了分析速度而降低了準(zhǔn)確性。
測量總蛋白質(zhì)很有用，因?yàn)檫@可以表明每一步的純化程度，但
除非下一步特別依賴于有多少蛋白質(zhì)存在，否則總蛋白質(zhì)測量也并
不是十分重要，可以留出一個小樣品，當(dāng)純化完成后再進(jìn)行測量。
然而，知道較終產(chǎn)物(假設(shè)是純樣品)中有多少蛋白質(zhì)則十分重要，
因?yàn)閾?jù)此可以計算比活(如果該蛋白質(zhì)有活性的話)，并可與其他制
備物的比活進(jìn)行比較。通常的目標(biāo)是獲得盡可能高的比活(考慮到
回收率)，這意味著要保留盡可能多的目的蛋白，而較后總蛋白質(zhì)
的量則越少越好。蛋白質(zhì)分離和純化方法
蛋白質(zhì)純化的現(xiàn)有方法范圍很廣，從簡單的沉淀(從19世紀(jì)就
開始使用)到復(fù)雜的層析和親和技術(shù)，后者不斷地得到發(fā)展和改進(jìn)
。方法可被分成幾種不同的類別(或許較好的一種是基于正在研究
的蛋白質(zhì)的特性)，如根據(jù)蛋白質(zhì)的特點(diǎn)，可以將方法分成明顯不
同但又相互關(guān)聯(lián)的4組：表面特征、結(jié)構(gòu)、凈電荷和生物學(xué)特性。
