酶這樣的大分子常會有好幾個溶解度較小點
酶的x射線結(jié)晶分析學(xué)
x—射線結(jié)晶分析學(xué)是用x射線衍射手段研究分子在晶體中的三
維結(jié)構(gòu)。一個酶結(jié)晶的晶體格子中，各個原子排列非常規(guī)則，原子
周圍的電子云經(jīng)x射線照射后會發(fā)生散射，其散射強度將隨電子云
的密度增加而增加，亦即隨原子序數(shù)的不同而有變化。這些散射的
結(jié)果如果收集在底片或磁帶上，經(jīng)過測量和電子計算機的運算，即
可算出整個酶分子的三維結(jié)構(gòu)。
結(jié)晶的培養(yǎng) x射線衍射分析需要先培養(yǎng)出體積肥大、形狀適
當?shù)膯尉�。以現(xiàn)有的x射線衍射技術(shù)，晶體每個方向的厚度不得少
于0．2mm。晶形良好但過于細長或扁平的晶體并不適用。
像酶這樣的大分子在溶劑中相互間的作用非常復(fù)雜，有時甚至
難以理解，無法描述。但是結(jié)晶的基本原則是怎樣能使純酶的溶液
慢慢地達到溶解度較小的狀態(tài)，從而誘導(dǎo)酶分子在稍過飽和的溶液
中，進入晶體格子的適當位置，使分子相互間發(fā)生較有利的作用，
遂從溶液中結(jié)晶出來。
像酶這樣的大分子常會有好幾個溶解度較小點，隨大分子本身
的濃度，緩沖液的性質(zhì)及濃度、pH、溫度等因素而定。這可由某些
蛋白質(zhì)會有多晶形同時存在的事實得到證明。而每當我們找到了這
樣的條件，就可以在酶溶液中加入適量的沉淀劑，使酶結(jié)晶出來。
為了確保能得到晶形完好的單晶，必須配合各種蛋白質(zhì)的濃 度，
緩沖液的性質(zhì)，沉淀劑的種類及用量、pH、溫度等，以達到較適當
的沉淀點。因為涉及的條件太多，譬如pH，有時能不能夠得到好的
單晶，相差只在0．1上下，所以較初尚有一些原則可循，到了后來
，簡直是在黑暗里摸索了。有時常要作過幾千個試驗，才能找到培
養(yǎng)酶單晶的較好條件。
又酶分子是柔性的，在溶液中其構(gòu)象會隨環(huán)境的變遷而改變，
呈不斷的運動狀態(tài)。如何能夠使這樣的酶分子變得比較穩(wěn)定，不那
么柔軟好動，亦即使全體分子更為均質(zhì)化，以利于晶體的生長，非
常難以解決。通常都是加入適當?shù)男》肿优潴w，如經(jīng)過修飾的底物
、輔酶及競爭性抑制劑等。也可以試將酶分子本身加以修飾，以達
到目的。
一般都先用懸滴蒸汽擴散法(Hangingdropvapordiffusion)宋
搜尋這個能進行結(jié)晶的試點。
