用來測定分子量-蛋白質(zhì)的近似分子量技術(shù)測定
大小和形狀的測定
詳細討論用物理技術(shù)來測定酶分子的大小和形狀，
找出蛋白質(zhì)的近似分子量較常用的方法之一就是凝膠過濾法。將欲
測的蛋白質(zhì)溶液通過一個裝有用交聯(lián)多聚體制成的小珠狀體的柱。小分
子(如氨基酸)能夠穿透珠狀體的細孔，較大的蛋白質(zhì)分子則不能穿透并
直接通過柱，也就是說都被珠狀體所斥。一些中等大小的分子比氨基酸
較難穿透凝膠珠狀體，從而也部分地被排斥掉了
這種技術(shù)的詳細理論是極其復雜的。不過實際用來測定分子量卻是
非常簡單的。將少量含有已知分子量的或未知分子量的蛋白質(zhì)濃溶液，
從凝膠珠狀體柱的頂部加入，凝膠珠狀體事先在適當?shù)木彌_溶液中泡脹
，并放入柱內(nèi)使形成一均勻的柱。用緩沖液從柱的頂部沖洗樣品，把通
過柱流出的液體收集在一個部分收集器中，分段收集器保持每部分的流
出液容積盡可能地小。洗脫一種特殊蛋白質(zhì)所用緩沖液的容積可用分析
該蛋白質(zhì)的各流出部分來測定。將已知分子量的蛋白質(zhì)洗脫容積，與未
知分子量的蛋白質(zhì)的洗脫容積加以比較，就可以估計出它的分子量，其
精確度約為5％。實際上，當用這種技術(shù)測定時，發(fā)現(xiàn)某些蛋白質(zhì)具有
一種不規(guī)則的分子量。這些蛋白質(zhì)一般是呈纖維狀或雪茄狀，所以，測
得的分子量不能給出一種真正的大小的指征。理論上講，凝膠過濾法是
假設(shè)蛋白質(zhì)是呈球形的，為了進入凝膠珠狀體網(wǎng)絡(luò)時不需要一種特異的
排列。顯然這種設(shè)想對于纖維狀分子來說是行不通的，因此測得的分子
量是變化不定的。
