熒光顯微鏡的物鏡盡可能采用較大的數(shù)值孔徑NA
標(biāo)本的特點(diǎn)為了增強(qiáng)熒光顯微鏡的使用效果,在設(shè)置熒光標(biāo)本切片
時(shí),應(yīng)具備以下特點(diǎn):
載玻片應(yīng)選用能透過(guò)短波紫外光的石英玻璃。厚度約為0.8—
1.2mm。過(guò)厚的玻片吸收紫外光較多,而且對(duì)暗視場(chǎng)聚光鏡效果有
影響。載玻片應(yīng)當(dāng)光潔,無(wú)油跡,無(wú)劃痕。
蓋玻片宜采用鍍膜玻璃。一般表面鍍有氟化鎂等若干層對(duì)不同
波長(zhǎng)的光起不同干涉作用的物質(zhì),這樣可以透過(guò)熒光而反射激發(fā)光
。反回的激發(fā)光能再次激發(fā)標(biāo)本,增強(qiáng)熒光的能量。
標(biāo)本取樣不能太厚,盡量薄一些,散開(kāi)要均勻,這樣能使標(biāo)本
得到充分、均勻的激發(fā)。盡量減少標(biāo)本重疊,互相掩蓋,否則因激
發(fā)不均勻,影響判斷。
標(biāo)本封載劑必須采用無(wú)熒光性能,無(wú)色透明的物質(zhì)。通常使用
分析純甘油緩沖液,其中甘油體積90%,磷酸鹽緩沖水10%,pH值
為7.2—8.5。固定蓋玻片時(shí),可用含量1%的明膠水,蓋上玻片
后,以10%的福爾馬林凝固。使用油鏡觀察時(shí),注意不能使用普通
的香柏油。因?yàn)橄惆赜驮谧贤夤庹丈湎掠休p微熒光效應(yīng),干涉觀察
。此時(shí)可在香柏油中拌入適量的熒光熄滅劑如硝基苯,減少香柏油
的熒光效應(yīng)。有條件時(shí),較好使用純檀香油,本身無(wú)固有熒光。用
純甘油緩沖液也可代用,但折射率略低一些,宜配用甘油浸液物鏡
。
對(duì)鏡頭的要求
為了提高熒光圖像的亮度,熒光顯微鏡的物鏡盡可能采用較大的
數(shù)值孔徑NA,同時(shí),物鏡和高倍目鏡中,透鏡膠合不能使用加拿大
樹(shù)脂膠。因?yàn)榧幽么髽?shù)脂膠主要成分冷杉樹(shù)脂在紫外線光激發(fā)下會(huì)
發(fā)生輕度的熒光效應(yīng),干擾觀察效果。所以熒光顯微鏡所用鏡頭的
透鏡膠合,一般用聚乙烯醇一類的合成膠。這種鏡頭在普通顯微鏡
均可應(yīng)用。