分離純化菌種過程中需要轉(zhuǎn)接菌落到液體培養(yǎng)基
菌落的轉(zhuǎn)接和純化
在分離純化菌種過程中需要轉(zhuǎn)接菌落到液體培養(yǎng)基中。
1．在菌落轉(zhuǎn)接前，首先用氣相色譜儀分析培養(yǎng)管中是否有甲
烷存在。若有甲烷，表明培養(yǎng)管中存在產(chǎn)甲烷菌菌落。鑒于在所有
厭氧菌中只有產(chǎn)甲烷細(xì)菌菌落能同時產(chǎn)生甲烷和熒光，所以可以在
雙筒解剖鏡下觀察不同形狀的菌落，在熒光顯微鏡下挑選產(chǎn)生熒光
的菌落。
2．按厭氧操作法常規(guī)要求，在裝有5mL液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)管中
，加入硫化鈉(1％)與碳酸氫鈉(5％)的混合液、青霉素液和所分離
產(chǎn)甲烷菌生長的相應(yīng)基質(zhì)各0．1mL。
3．把欲挑取菌落的厭氧培養(yǎng)管放置于解剖顯微鏡鏡臺上，調(diào)節(jié)雙筒
解剖鏡，找到欲挑取的菌落。用膠布固定培養(yǎng)管，不讓它移動。
4．將兩個氮氣流的針頭在酒精燈火焰上滅菌，分別打開裝有
液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)管膠塞，在將要拔出時，小心插入氮氣流針頭，
絕對避免空氣進(jìn)入?yún)捬跖囵B(yǎng)管。氮氣流針頭插進(jìn)長有菌落的厭氧培
養(yǎng)管后，用膠布固定以防止針頭脫出和空氣乘機(jī)竄人。氮氣流量應(yīng)
比其它操作時適當(dāng)大一些。
5．將約8℃m長的膠管掛于自己頸部，右端接一根內(nèi)裝有少許棉花
的滅菌毛細(xì)管，膠管左端銜于口中。右手拿住毛細(xì)管，插入打開膠
塞而有氮氣流的厭氧培養(yǎng)管中，用口吸去膠管和毛細(xì)管中的空氣，
從而使膠管和毛細(xì)管中充滿氮氣。
6．在膠管和毛細(xì)管中充滿氮氣后，右手大拇指和食指夾緊膠
管，同時用門牙咬緊在口中的膠管端，迅速取出并插入欲挑取菌落
的培養(yǎng)管中，毛細(xì)管細(xì)12：I輕輕接觸欲挑取的菌落，此時口輕輕
吸氣，使菌落吸進(jìn)毛細(xì)管口。然后謹(jǐn)慎移出毛細(xì)管，迅速插入含有
培養(yǎng)基的培養(yǎng)管，輕輕呼氣，使毛細(xì)管口處的菌落物進(jìn)入培養(yǎng)基。
呼氣不能過大，以避免使口中空氣吹入液體培養(yǎng)基，破壞培養(yǎng)基厭
氧環(huán)境。取出毛細(xì)管，塞好膠塞。
7．當(dāng)以氫和二氧化碳作基質(zhì)時，則用無氧的氫氣代替氮氣，
再加入3mL無氧的二氧化碳，或者直接使用氫氣和二氧化碳的混合
氣體。轉(zhuǎn)種后樣品置34～40℃下培養(yǎng)，培養(yǎng)好時，搖動培養(yǎng)物應(yīng)出
現(xiàn)云霧狀或乳白色膠團(tuán)。與未接入菌落的液體培養(yǎng)基相比，判斷是
否有產(chǎn)甲烷菌生長和生長的優(yōu)劣。
