用電子顯微鏡細(xì)胞中蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)定位的檢測(cè)
光致交聯(lián)和熒光技術(shù)用于檢測(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)過程
利用交聯(lián)技術(shù)已確定細(xì)胞質(zhì)中可與新生輸出蛋白質(zhì)發(fā)生相互作
用的蛋白質(zhì)組分。首先將這些研究中的輸出蛋白質(zhì)進(jìn)行放射性標(biāo)記
，然后采用截短的mRNA技術(shù)跟蹤轉(zhuǎn)運(yùn)工程
利用經(jīng)透化處理的細(xì)胞檢測(cè)核運(yùn)輸
經(jīng)透化處理的細(xì)胞對(duì)于研究細(xì)胞溶質(zhì)因子和三磷酸核苷酸在核
運(yùn)輸中的必要性非常有用。用低濃度的洋地黃皂甙使細(xì)胞通透化，
質(zhì)膜上發(fā)生穿孔，導(dǎo)致細(xì)胞組分釋放，僅留下完整的核膜和其他細(xì)
胞器。使用熒光顯微鏡，借助一種可進(jìn)入通透細(xì)胞的標(biāo)記蛋白來檢
測(cè)蛋白質(zhì)向核內(nèi)的輸入。細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)
研究蛋白質(zhì)的輸出有賴于蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)定位的檢測(cè)方法。利
用電子顯微鏡可以清楚地看到真核細(xì)胞中的細(xì)胞器和囊泡。使用這
種方法時(shí)，標(biāo)本被制成薄切片，在低溫下包埋在塑料中，較大限度
地減少結(jié)構(gòu)的改變，并用重金屬鹽染色。此外，免疫金電子顯微鏡
被用于確定蛋白質(zhì)在細(xì)胞中的位置。這種方法利用抗體對(duì)目標(biāo)蛋白
質(zhì)進(jìn)行處理，抗體上附著有小的金顆粒。對(duì)照抗體用來與細(xì)胞器或
囊泡中的目標(biāo)蛋白質(zhì)反應(yīng)，使其與不同大小的金顆粒相連。小的和
大的黑點(diǎn)代表電子顯微攝像中的金顆粒，經(jīng)過比較可用來確定蛋白
質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的定位。檢測(cè)活細(xì)胞中輸出蛋白質(zhì)的定位也是有益的工
作。
