菌落中有不同株系的真菌-原生質(zhì)體分離技術(shù)
單菌絲和單孢子分離
一般的分離方法不能排除菌落中有不同株系的真菌存在，在進一步
研究真菌的遺傳性、變異性、準(zhǔn)性生殖等現(xiàn)象及菌株的精確生理指標(biāo)時
，有必要要求菌種由單孢子或單菌絲繁殖而來。
稀釋挑取法用2mL注射器及4號或5號注射針頭，將針尖用三角銼銼
平，使滴下的水滴大小不超過80一150倍低倍鏡的視野，這樣改裝的注
射器即為單孢子分離注射器。以無菌的這種注射器吸取制備好的真菌孢
子懸液，使其孢子的濃度在每滴有。一2個孢子的范圍內(nèi)，把懸液滴在
無菌的載玻片上，鏡檢確系只有1個孢子后，再接種于培養(yǎng)平皿中培養(yǎng)
。也可將懸液滴在水瓊脂平皿中，滴下的位置用記號筆標(biāo)出，然后鏡檢
，確系是單孢子后，再用切取器將帶有小塊孢子的瓊脂切下，移置到培
養(yǎng)基中培養(yǎng)。切取器可用鋼絲、鉑絲或鎳鉻合金絲制成，先將金屬絲打
扁，彎成直徑2mm的小環(huán)，或彎成扁平的鉤，以便挑起移植切下的瓊脂
小塊。
2．單菌絲分離法 在研究中有時需要切割菌絲體，進行單菌絲
分離。單菌絲分離方法是將真菌移植在清潔的水瓊脂平板(15—209
瓊脂，水1 000ml，高壓滅菌)上，培養(yǎng)后在立體顯微鏡下尋找單根
伸長的菌絲，用磨得尖銳的接種針或接種鉤，將菌絲先端連同瓊脂
一起切下，移接在培養(yǎng)基上培養(yǎng)。由于水瓊脂缺乏營養(yǎng)，菌絲生長
稀疏，易于尋找到單個的菌絲。
3．原生質(zhì)體分離法 利用細胞壁分解酶裂解菌絲體或芽生孢子
時，原生質(zhì)體便會從菌絲頂端或待孢子細胞壁被消化后釋放出來。多
細胞真菌每個菌絲細胞釋放一個原生質(zhì)體或分裂為若干個。因而通
過原生質(zhì)體的分離及再生可以獲得單細胞株系，或比單細胞還小的
單核原生質(zhì)體發(fā)育而來的株系。用這種方法可以一次獲得大量的由
原生質(zhì)體單元而來的菌株，工作效率很高。
4．顯微操作器分離法 顯微操作器實質(zhì)上是一種微調(diào)的機械
手，用來代替人手的直接操作，進行細胞分離、解剖、注射、單孢
子分離和茵絲切割等，有關(guān)原理和應(yīng)用操作詳見各儀器所附的說明
書或?qū)ｉT文獻。
