熒光成像技術即熒光斑點顯微鏡術(FSM)的應用
一種熒光成像技術，即熒光斑點顯微鏡術(FSM)，該技術用于
觀察肌動蛋白與微管蛋白等細胞內(nèi)蛋白復合物的動力學、運轉及更
新。該技術原理在于向大分子結構內(nèi)注射入低濃度的熒光亞單位，
它與未被熒光標記的內(nèi)源性亞單位共同裝備蛋白質，這樣就可在分
辨率有限的熒光圖像中觀察到感興趣的結構內(nèi)的熒光斑點排布。熒
光斑點排布的改變可用于定量分析結構的組裝、拆解及運動。與傳
統(tǒng)的熒光成像技術相比，該技術大大減少了離焦熒光，所以熒光標
記結構的熒光斑點大大增強了。此外，與僅可檢測小范圍標記部分
的光敏化和光漂白技術相比，F(xiàn)SM則可檢測整個細胞內(nèi)的蛋白質動
力學。作為該技術有用性的例證，采用FSM技術研究活細胞內(nèi)微管
蛋白與肌動蛋白細胞骨架的動態(tài)變化的方法，并詳述了熒光標記微
管蛋白與肌動蛋白的方法及延時成像技術。
近年來，以水母(Aequoria victoria)的綠色熒光蛋白作為探
針來研究活細胞甚至活體內(nèi)的特定蛋白質的技術在逐步發(fā)展。綠色
熒光蛋白(GFP)及其基因變異體，并舉例說明如何用GFP來研究活細
胞內(nèi)特定的GFP融合蛋白的定位及遷移。
光學顯微鏡的校準及調節(jié)
本單元講述經(jīng)典的研究型復合光學顯微鏡以透射及反射照明成
像模式工作時校準與調節(jié)的方法，而這兩種成像模式是該顯微鏡在
生物醫(yī)學研究領域的常用模式。透射光模式包括亮視場和相差，而
反射照明的主要模式為熒光顯微鏡術。
