電子顯微鏡物理固定一般采用低溫冷凍使之由液態(tài)變固態(tài)
取樣與固定
第一個遇到的問題是取樣。首先要注意研究對象的空間和時間位置
。比如，想研究花粉發(fā)育，就要分期采取從幼小到成熟的花藥；想研究
受精，就要估計受精過程的大致時間范圍，在此期間分批采取子房與胚
珠樣品。有些植物的受精過程較長，有數(shù)天至數(shù)月之久，取樣可以按小
時或天數(shù)計；有些植物的受精過程短促到數(shù)小時內(nèi)即已完成，那就必須
按分鐘計，分批取樣，才能捕捉受精的各個瞬間。
采集的樣品是新鮮的生活材料，如欲觀察其中的生活狀態(tài)，必須設
法直接觀察，但更經(jīng)常的做法是對樣品施行化學的或物理學的處理，使
之盡可能保持當時的細胞狀態(tài)，這叫“固定” (fixation)。固定的作
用可以用煮雞蛋或腌制皮蛋來比喻：鮮蛋是溶膠狀態(tài)的，不能用刀切；
煮熟或腌制后變成凝膠狀態(tài)，便可以切片了。化學固定使用各種固定劑
，如光鏡觀察中常用的酒精、醋酸、福爾馬林以及上述藥品的種種混合
配方，電鏡觀察中的戊二醛、鋨酸等。不過，經(jīng)過化學固定，細胞已被
殺死，結(jié)構(gòu)會發(fā)生改變，不可能完全保存生活時的原貌，所以觀察結(jié)果
只能獲得近似值。物理固定一般采用低溫冷凍，使材料由液態(tài)變?yōu)楣虘B(tài)
，猶如豆腐變成凍豆腐那樣，也可以保存和切片。這種固定方法的較大
優(yōu)點是能保存那些化學固定劑保存得不夠理想的活性蛋白質(zhì)(如酶)，因
此在免疫細胞化學研究上大派用場，甚至是不可或缺的手段。這是因為
，免疫細胞化學的研究目標是細胞內(nèi)特定的抗原(主要是蛋白質(zhì)分子)，
要通過抗原一抗體反應來對它們進行定位，而抗原很容易在化學固定中
遭到不同程度的破壞和流失，從而導致假象。而快速冰凍則可大大減少
這方面的損失。
