多重標記實驗熒光顯微鏡采用不同濾光鏡組合
熒光顯微鏡檢測的原理是用一定波長(激發(fā)波長)的光激發(fā)熒光
染料中的電子，使它們躍遷到外層電子層。這些激發(fā)的電子很不穩(wěn)
定，在回到穩(wěn)定狀態(tài)的過程中將釋放能量，即發(fā)射熒光(發(fā)射波長)
。激發(fā)光通常是用高壓汞或氙電弧燈產(chǎn)生，它可以發(fā)射出高強度的
所需波長的光。用濾光鏡選擇合適的激發(fā)波長的光后，即可以顯示
某一特定的熒光染料。較常用的熒光染料有DAPI(在[1V光激發(fā)下發(fā)
出藍色熒光)、FITC和熒光素(藍光激發(fā)下發(fā)出綠色熒光)。
在多重標記實驗中，可以采用不同的濾光鏡組合對同一圖像進
行多次曝光，拍下不同熒光染料的圖像。如果每個濾光鏡組合的排
列是相同的，而且發(fā)射濾光鏡的表面是完全平行的，那么就不會有
問題，而且可以對每種熒光染料的曝光時間進行優(yōu)化。但是不同的
濾光鏡不能排齊時，問題就來了，因為多次曝光產(chǎn)生的重疊圖象會
被抵銷�，F(xiàn)在可以用兩重或三重濾光鏡塊解決這一問題。分別顯示
兩或三種熒光染料并同時拍攝下來，如果人們需要對不同探針的相
對位置進行精確判定的話，這一點就非常重要了。
多重標記和再雜交
在檢測植物中的低拷貝序列時一般建議不要同時對一個以上的
探針進行檢測，因為增加的檢測試劑有可能會增加背景信號。但是
，如果背景不成為問題的話，那么由此得到的增加的信息對于植物
染色體定位作圖來說將極具價值，因為定位的速度加快了，并且可
以將序列彼此之間進行排序
