氣一液層析純化能得到很高的分辨率和靈敏度
采用任何純化操作不可避免地會(huì)丟失一些物質(zhì)。純化的
步驟應(yīng)越少越好,這一點(diǎn)很重要。因此,所用的技術(shù)必須對(duì)小
量的物質(zhì)能給出較大的分辨率。薄層層析、氣一液層析、醋酸
纖維素電泳、圓盤電泳、離子交換和親和層析等技術(shù)是非常適
用的。較好的方法可能是氣一液層析(在能適用的情況下),因
為它能得到很高的分辨率和靈敏度,并且可用于定性和定量
的分析。在這方面氮?dú)鈾z測(cè)器特別優(yōu)越,因?yàn)轭A(yù)純化所需要
的量較小。
在能使用的情況下,親和層析是十分有用的,因?yàn)樗且?BR>生物特異性為基礎(chǔ)。從理論上講它能給出絕對(duì)的純化作用和
很高的產(chǎn)率。這項(xiàng)技術(shù)的潛力至今還沒(méi)有充分的發(fā)揮,特別
是在用于大量物質(zhì)的分離方面。液一液分配層析、吸附柱層析
和通透層析技術(shù)一般不作為分析性分離,因?yàn)樗鼈兊姆直婺?BR>力一般較低,并且可能發(fā)生物質(zhì)的顯著丟失。
制備性分離
高分辨率的分離方法一般具有有限的能力,不能用于大
量物質(zhì)的分離。因此,在制備性分離中,通常先使用大容量的
方法,因而可能分辨率很低。所以,沉淀、透析、吸附、液一液分
配柱層析和逆流分溶等技術(shù)是重要的,因?yàn)�,雖然它們不可能
達(dá)到其他方法那樣好的分辨率,但它們能按比例地增加來(lái)對(duì)
付大量的物質(zhì)。然后,可以使用一些高分辨率的方法,如離子
交換、制備性凝膠電泳和制備性氣一液層析,用作較后的純化。
分離所用的方法應(yīng)盡可能地根據(jù)許多不同的特性為基
礎(chǔ)。當(dāng)使用現(xiàn)代分離技術(shù)時(shí),在使用了一種特殊的方法以后,
接著使用一種按相同物理特性來(lái)分離的方法是很難得到進(jìn)一
步的純化。
面臨著要選擇一種特殊的方法(或一些方法)來(lái)純化一種
化合物,很明顯的,雖然理論上可以使用幾種技術(shù),但實(shí)際上,
某些技術(shù)可能更好一些。在決定采用哪一種技術(shù)時(shí),應(yīng)當(dāng)考
慮到一些因素,包括:
(1)是分析性的分離,還是制備性的分離,以便考慮技術(shù)
的分辨率和(或)能力,
(2)化合物的物理特性,如溶解度、揮發(fā)性、分子量和電
荷特性,
(3)化合物在特殊處理時(shí)的穩(wěn)定性,
(4)考慮文獻(xiàn)中所記載過(guò)的比較成功的分離方法,
(5)設(shè)備和技術(shù)條件,
(d)方法的費(fèi)用。