應(yīng)用目鏡測微尺測定分析顯微鏡-原生質(zhì)測定實驗
當(dāng)使用灌流小室時,所需的操作較為簡單。先把組織放在盛有一滴礦
泉水的敞開的灌流小室中,當(dāng)滲透小室密封后,為檢驗正常的灌流運(yùn)行,
先用礦泉水灌流片刻,然后用滲透溶液(如1M的脲溶液)代替礦泉水,且選
擇一個合適的細(xì)胞進(jìn)行測定,該細(xì)胞的橫向細(xì)胞壁必須完全平行。即使有
一點不平行,也將導(dǎo)致原生質(zhì)長度和時間關(guān)系圖的斜率發(fā)生改變,并使透
性常數(shù)產(chǎn)生偏差。只要原生質(zhì)體末端是圓形的,在質(zhì)壁分離復(fù)原之前,如
果可能的話,應(yīng)用目鏡測微尺在適當(dāng)?shù)臅r間間隔內(nèi)測定記錄原生質(zhì)體的長
度
用原生質(zhì)測定法測定水分透性
在許多生理過程中,活原生質(zhì)對水的透性是一個非常重要的因素。原
生質(zhì)透性的測定方法隨實驗條件和組織的不同而改變。測定質(zhì)壁分離和質(zhì)
壁分離復(fù)原可以進(jìn)行水的絕對透性常數(shù)的計算,可直接與溶質(zhì)的絕對透性
常數(shù)值相比較。
水的透性實驗裝置和測定步驟與上面介紹的相同�;靖拍钍�。當(dāng)細(xì)
胞從一非透過溶液中突然轉(zhuǎn)移到濃度相差較大的同樣溶液中時,盡可能地
密切注意原生質(zhì)體長度相應(yīng)的快速變化。細(xì)胞液與新的外部溶液問的滲透
平衡建立的時間進(jìn)程可用來計算水的透性常數(shù)。
然而,這個平衡建立的時間進(jìn)程也依賴于其它因素,如原生質(zhì)粘度或
液泡內(nèi)部的擴(kuò)散阻力。在這些情況下,由于體積變化非常迅速,這些因素
比實驗中所用的滲透物質(zhì)的影響更明顯。盡管這些因素使實驗的復(fù)雜性增
加,當(dāng)選用的材料合適時,用原生質(zhì)測定法仍能得到很好的結(jié)果。用這種
方法所求得的水的絕對透性常數(shù)與在植物材料中用擴(kuò)散方法測得的水的透
性常數(shù)值處于同一數(shù)量級,且與用各種實驗方法在動物細(xì)胞中所測得結(jié)果
處于同一數(shù)量級。
為了使實驗結(jié)果更準(zhǔn)確,使用縮時攝影技術(shù)可以更精確地建立原生質(zhì)
體長度和時間的關(guān)系。就第二種處理溶液而言,既可使用高濃度,也可使
用低濃度。在高濃度溶液中發(fā)生部分質(zhì)壁分離,而在低濃度溶液中發(fā)生質(zhì)
壁分離復(fù)原。